人低氧诱导因子1-α转染人骨髓内皮祖细胞的体外实验

• 作者: 姚程 姜振宇 宋晓燕 林海
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人低氧诱导因子1-α 基因转染 内皮祖细胞
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 944-948
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:将人低氧诱导因子1-α(HIF1-α)转染人骨髓内皮祖细胞(EPCs),为探讨转染HIF1-α基因的EPCs对梗塞心肌血管修复及血管再生能力提供依据.方法:密度梯度法分离人骨髓中单个核细胞,以1×106?mL-1细胞浓度接种于用纤维连接蛋白包被的培养皿中,培养14 d后采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性成分ecNOS、flk-1的表达;采用acLDL-Dil和FITC-UEA-1对细胞染色;采用LipofectamineTM 2000介导PCDNA3.0-HIF1-α质粒转染EPCs,RT-PCR检测HIF1-α的转录;ELISA检测细胞上清中VEGF表达;免疫印迹法检测HIF1-α蛋白表达.结果:培养第5天起,部分圆形单核细胞转化为梭形贴壁EPCs,7 d左右出现由数十个细胞形成的细胞集落,10 d后形成明显克隆.RT-PCR检测ecNOS在548 bp处出现条带,flk-1在819 bp处出现条带;acLDL-Dil和FITC-UEA-1双染色阳性;RT-PCR在383 bp处出现特异性条带;ELISA转染HIF1-α的EPCs上清中VEGF含量为(20.53±2.33)μg·L-1,未转染HIF1-α的EPCs上清中VEGF含量为(3.96±1.67)μg·L-1,两组比较差异有显著性(P<0.05).免疫印迹法(Western blotting)检测在相对分子质量120 000处出现条带.结论:PCDNA3.0-HIF1-α质粒成功转染EPCs.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜振宇	吉林大学第一医院血液肿瘤科	74	366	9.0	15.0
2	姚程	吉林大学第一医院血液肿瘤科	57	169	8.0	10.0
3	林海	吉林大学第一医院血液肿瘤科	31	100	6.0	8.0
4	宋晓燕	吉林大学第一医院血液肿瘤科	4	4	2.0	2.0