组织块培养的人脐带源性间充质干细胞的生物学特性

• 作者: 姜文华 杨立明 毕黎琦
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞 人脐带 诱导分化
• 年，卷（期）: 2008,（47）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9221-9225
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.47.004

摘要

背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但骨髓源性间充质干细胞存在病毒污染的可能,且随年龄增长其细胞数量和扩增分化能力会出现明显下降,因此需要寻找新的间充质干细胞来源.目的:拟采用组织块培养法从人脐带中分离间充质干细胞,并观察其生物学特性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-03/2008-05在吉林大学白求恩医学院组胚教研室完成.材料:脐带来自正常足月产健康婴儿,产妇及家属均知情同意.方法:采用组织块法分离培养和扩增间充质干细胞:将脐带剪碎至1 mm×1 mm×1 mm大小组织块,置于培养瓶中,并在组织块表面覆盖载玻片防止其漂浮,加入含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液培养.细胞贴壁后,每隔三四天更换培养基,待细胞出现集落生长达60%以上汇合后,弃组织块,消化后,按1:2～1:3的比例传代.取第7代细胞在含地塞米松、抗坏血酸、β-磷酸甘油、含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液与含体积分数为0.10胎牛血清、地塞米松、胰岛素、吲哚美辛、1-甲基-3-异丁基一黄嘌呤、抗坏血酸、青霉素和链霉素的DMEM/F12培养液中诱导其成骨及成脂分化.主要观察指标;光、电镜观察获得的人脐带源性间充质干细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期、免疫表型,碱性磷酸酶染色及油红0染色鉴定细胞分化能力.结果:组织块贴壁后1周可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,2周后,细胞形态变为均一的纺锤形.透射电镜观察第5代和第7代细胞均为幼稚形态的细胞,细胞膜表面不光滑,核大,不规则,核仁明显,常染色质多,异染色质少,胞浆少,胞浆内可见较多游离核糖体,此外还可见粗面内质网和线粒体.流式细胞术分折细胞周期显示,第3,5,7代70%以上的细胞处于Go/G1期;第3,5,7代细胞均强烈表达CD105、CD90、CD44,不表达CD34、CD31、CD45.第7代细胞在体外可定向诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞.结论:采用组织块培养法可从人脐带中分离出具有间充质干细胞特性的细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨立明	吉林大学中日联谊医院风湿免疫科	102	663	14.0	18.0
5	姜文华	吉林大学白求恩医学院组胚教研室	48	308	9.0	16.0
6	毕黎琦	吉林大学中日联谊医院风湿免疫科	42	345	12.0	17.0