重组人肝细胞生长因子在人脐带间质干细胞中高效表达

• 作者: 刘安民 李国 李方成 潘伟生 罗铭 蔡望青 邓跃飞
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子 慢病毒载体 载体构建 脐带间质干细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2450-2454
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 3826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.12.033

摘要

目的:构建能表达人肝细胞生长因子(hHGF)的pWPI-hHGF载体,并将含hHGF基因的重组慢病毒载体转染人脐带间质干细胞(hUCMSCs),观察人脐带问质干细胞中hHGF的表达情况.方法:将携带目的基因hHGF的pUC-SRa/hHGF质粒亚克隆到真核细胞表达载体pWPI载体上,构建重组质粒pWPI-hHGF.基因测序进行HGF的鉴定.用磷酸钙沉淀法,将pWPI-hHGF、pAX2、pMD2G共同转染包装细胞293T细胞,获得携带目的基因hHGF和GFP基因的重组慢病毒pWPI-hHGF.将pWPI-hHGF及阳性对照质粒pWPI-GFP分别用Lipofectamin 2000介导转染体外培养的hUCMSCs.在荧光显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率.蛋白印迹法检测HGF和GFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液hHGF含量.结果:DNA测序显示hHGF基因成功地插入到pWPI载体中.包装细胞293T转导pWPI-HGF质粒后,转染阳性率达100%.阳性对照质粒转染人脐带间质干细胞24 h后,在荧光显微镜下观察,其转染效率达80%以上.蛋白印迹法检测靶细胞中hHGF表达呈强阳性,而对照组表达量极低,两者差异显著(P<0.01).检测收集转染hHGF后的人间质干细胞上清液中hHGF的表达含量明显高于对照组(P<0.01).结论:构建的在真核细胞内表达hHGF的重组质粒pWPI-hHGF转染人脐带间质干细胞,能获得hHGF基因在人脐带间质干细胞中大量、稳定的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗铭	中山大学孙逸仙纪念医院肿瘤科	27	87	6.0	7.0
2	邓跃飞	中山大学孙逸仙纪念医院神经外科	43	182	8.0	10.0
3	刘安民	中山大学孙逸仙纪念医院神经外科	41	194	8.0	12.0
4	李方成	中山大学孙逸仙纪念医院神经外科	42	199	8.0	11.0
5	蔡望青	中山大学孙逸仙纪念医院神经外科	31	170	7.0	12.0
6	潘伟生		15	113	7.0	10.0
7	李国		2	13	2.0	2.0