中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达、纯化及活性特征

• 作者: 廖剑
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 硫氧还蛋白过氧化物酶 青岛文昌鱼 原核表达 蛋白质纯化 酶活性 结构
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 781-786
• 页数: 6页
• 分类号: R345.46
• 字数: 5492字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2008.07.017

摘要

目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白.方法:将已获得的TPx cDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx.37℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.获得的重组TPx蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白.并对重组蛋白进行活性鉴定和结构分析. 结果:构建的重组质粒pET-32a(+)M-TPx在大肠杆菌中高效表达,经纯化后的重组TPx蛋白纯度可达90%以上,其单体相对分子质量为24 460.重组TPx蛋白是以同源二聚体和单体混合的形式存在,在二硫苏糖醇(DTT)存在时具有还原H2O2活性和对超螺旋DNA或对硫醇基敏感蛋白的保护作用. 结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了重组TPx蛋白,并且证实其活性与其高级结构紧密相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖剑	南京军区福州总医院检验医学研究所	12	41	3.0	6.0