周期蛋白D1在蛋白激酶C调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

• 作者: 乔礼芬 倪望 刘先胜 张建 徐永健 杜春玲 谢俊刚 陈仕新
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 哮喘 蛋白激酶C 细胞周期蛋白D1 气道平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2214-2219
• 页数: 6页
• 分类号: R562.25
• 字数: 4690字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.11.028

摘要

目的:观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化及两者表达相关性,探讨cyclin D1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用.方法:卵清蛋白(OVA)吸入制备SD大鼠2周哮喘模型,原代培养ASMCs.采用正常大鼠(N组)和模型大鼠(A组)第3-6代细胞,分别应用PKC特异性激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)及抑制剂Ro-31-8220干预ASMCs,根据不同处理分为4组:(1)空白组;(2)10 nmol/L PMA组;(3)10 nmol/L PMA+5μmol/L Ro-31-8220组;(4)5μmol/L Ro-31-8220组.采用流式细胞术,四甲基偶氮唑盐(MTT)法,增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察药物对ASMCs增殖的影响.RT-PCR方法检测PKC-α和cyclin D1 mRNA表达水平,Western blotting方法检测PKC-α和cycHn D1蛋白表达水平.线性相关分析评价PKC-α和cyclin D1表达水平的关系.结果:(1)在哮喘组,与空白对照比较,PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率,差异显著(P＜0.01).在正常组,与空白对照相比,PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率差异均显著(P＜0.01).(2)哮喘组内PMA组、Ro-31-8220组PKC-α以及cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平与空白对照比较,差异显著(P＜0.01).正常组和哮喘组变化趋势一致.(3)在mRNA水平,大鼠ASMCs PKC-α和cycHn D1的表达呈明显正相关(r=0.476,P＜0.05),在蛋白水平两者的表达亦呈明显正相关(r=0.899,P＜0.01).结论:PKC-α能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖,其在基因和蛋白的表达水平与cyclin D1的表达呈正相关,提示PKC-α可能通过调节cyclin D1而影响ASMCs的增殖.