人干扰素α-2b基因重组卡介苗的构建与鉴定

• 作者: 丁国庆 周卸来 廖国栋 沈周俊 陈善闻
• 来源期刊: 中华外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卡介苗 膀胱肿瘤 干扰素α-2b 基因重组
• 年，卷（期）: 2008,（13）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1022-1026
• 页数: 5页
• 分类号: R9
• 字数: 4315字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-5815.2008.13.017

摘要

目的 构建能自动分泌表达人干扰素α-2b(IFNα-2b)的重组卡介苗(rBCG-IFNα-2b)菌株,并对其进行鉴定.方法 分别从人外周血和BCG基因组中提取DNA,聚合酶联反应(PCR)扩增人IFNα-2b基因和BCGAg85B信号肽基因,将该两片段插入质粒pMV261,构建分泌型卡介苗穿梭表达载体pMV261-Ag85B-IFNα-2b.电穿孔将该载体导入BCG中,构建rBCG-IFNα-2b.分别用PCR扩增和Western blot检测rBCG-IFNα-2b中人IFNα-2b基因和蛋白的表达情况,酶联免疫吸附(ELISA)检测rBCG-IFNα-2b培养上清中IFNα-2b蛋白的表达情况.结果 采用酶切、PCR扩增及DNA测序对pMV261-Ag85B-IFNα-2b进行鉴定,结果 显示BCG Ag85B信号肽片段和人IFNα-2b片段与文献结果 一致,连接方向正确.以rBCG-IFNα-2b DNA为模板、IFNα-2b引物进行PCR扩增后得到与理论上大小相同的扩增片段,Western blot显示rBCG-IFNα-2b的培养上清和菌体中均可检测到IFNα-2b蛋白的表达,且培养上清中蛋白的表达量明显多于菌体,ELISA法可检测到培养上清中有高表达的IFNα-2b蛋白(301.45 pg/ml).结论 成功构建了能自动分泌表达人IFNα-2b的新型重组卡介苗菌株rBCG-IFNα-2b,为进一步研究其免疫活性和抗膀胱肿瘤疗效奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈周俊	上海交通大学医学院附属瑞金医院泌尿外科	112	527	12.0	15.0
2	陈善闻	浙江大学医学院附属第一医院泌尿外科	26	143	6.0	11.0
3	周卸来	浙江大学医学院附属第一医院泌尿外科	6	16	3.0	3.0
4	廖国栋	浙江大学医学院附属第一医院泌尿外科	1	1	1.0	1.0