摘要:
背景:牛磺酸是晶状体内重要的非酶系统抗氧化剂,其抗氧化效能的作用机制主要是通过其抗脂质过氧化反应,保护晶状体免受氧化损伤.目的:实验拟进一步观察体外条件下,外源性牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的影响.设计:随机对照动物实验.单位:青岛大学医学院附属医院眼科.材料:实验选用成年新西兰标准兔75只,雌雄不拘,体质量1.5~2.5 kg,由青岛市实验动物中心提供.实验所用的原位细胞凋亡检测试剂盒由美国Sigma公司生产,牛磺酸和过氧化氢由上海光达化学试剂厂生产.方法:实验于2005-05/2007-06在青岛大学医学院附属医院眼科和中心实验事完成.取兔晶状体,并随机分为3组:对照组,无血清无酚红的MEM培养基培养;氧化损伤组,含1 mmol/L过氧化氢溶液的无血清无酚红的MEM培养基培养,每6h再加入62 μL过氧化氢溶液(30 g/L);牛磺酸组,用含1 mmol/L过氧化氢溶液和10 g/L牛磺酸的无血清无酚红的MEM培养基培养.实验中对动物的处置符合动物伦理学标准.主要观察指标:观察培养6,12,24,48和72 h后晶状体混浊情况;采用DNA缺口末端原位法及DNA片段分析法检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况.结果:①晶状体混浊情况:氧化损伤组随氧化损伤作用时间延长,晶状体混浊度逐渐加重,而牛磺酸组晶状体混浊情况明显轻于氧化损伤组.②晶状体上皮细胞凋亡情况:对照组在培养的72 h内一直未见有凋亡细胞.而氧化损伤组随氧化损伤作用时间延长,凋亡细胞逐渐增多,72h时全为凋亡细胞.自培养24h开始,牛磺酸组开始有少量凋亡细胞出现,随培养时间延长,凋亡细胞逐渐增多,72 h时接近30%.各培养时间点牛磺酸组凋亡率都明显低于氧化损伤组,差异有显著性意义(q=8.6845,P<0.01),牛磺酸组和对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05).③DNA片段分析结果:培养24,36,48,72 h氧化损伤组晶状体上皮细胞DNA琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状条带;培养24 h时对照组和牛磺酸组则不出现此变化而仅呈现正常细胞条带.结论:牛磺酸可抑制氧化损伤诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡,减轻晶状体混浊.