兔阴道平滑肌细胞体外分离与培养

• 作者: 刘伟 刘德武 李文芳 章杰
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 阴道 平滑肌细胞 体外培养
• 年，卷（期）: 2008,（46）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9090-9094
• 页数: 5页
• 分类号: R329.2
• 字数: 6374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.46.025

摘要

背景:阴道平滑肌细胞原代培养主要有两种方法:酶消化法和组织块贴擘法.前者培养所需时间短,产量高,但所需组织量较大,且试验中污染机会大,最佳消化时间不易把握;后者虽方法简便、有效.但培养所需时间较长.目的:观察组织块+酶消化法原代培养兔阴道平滑肌细胞时间,并与组织块法比较.设计、时间及地点:体外观察实验,于2005-02/2006-1D2在南昌大学第一附属医院烧伤研究所及动物实验室完成.材料:四五个月龄雌件新西兰大白兔,体质量2.0-2.5kg.方法:①组织块法原代培养阴道平滑肌细胞:将修剪好的1 mm×1 mm×1 mm组织块均匀地接种于培养皿中.然后放入37℃恒温培养箱中静置培养3.0-4.0h,待组织块贴壁牢固后.再补加含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液,使组织块浸于培养液中,37℃恒温静置培养3.0-4.0 d.待细胞游出后换液,大约每3天换液一次.②组织块+酶消化法原代培养阴道平滑肌细胞:将组织块用0.1%胶原酶Ⅳ在37℃培养箱中消化0.5-1.0 h,至组织块边缘变毛时中止消化,然后将消化好的组织块接种于培养皿上,其余步骤同组织块法.③传代培养:第1次传代时机应根据细胞生长具体情况而定,在细胞达50%～60%融合时即进行传代培养.第2次以后传代,在细胞生长达80%融合时进行传代培养.主要观察指标:①原代培养所需时间.②第3代阴道平滑肌细胞表面结构和超微结构.结果:组织块+酶消化法原代培养细胞萌出时间较组织块法早1.0-2.0 d,细胞融合时间较组织块法早3.0-4.0 d,细胞可稳定传5-6代.倒置显微镜卜观察两种方法所培养细胞呈梭形或多角形,融合时部分区域细胞出现平滑肌细胞特征性生长表现"峰-谷"状结构.透射电镜下观察,第3代阴道平滑肌细胞核呈锯齿状,胞浆内含平滑肌细胞特征性结构肌丝和密体,含有大量高尔基体,粗面内质网扩张,游离核糖体丰富,提示获得合成表型阴道平滑肌细胞比例大.结论:组织块+酶消化法原代培养周期较短,需要注意的是在取材、分离整个操作过程中需保持阴道组织块湿润;胶原酶消化组织块时间不应过长,以组织块周边呈现毛须状为度;此外应在静置状态下培养.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟	南昌大学第一附属医院整形美容科	201	2194	23.0	36.0
2	章杰	南昌大学第一附属医院整形美容科	28	76	5.0	6.0
3	刘德武	南昌大学第一附属医院整形美容科	1	1	1.0	1.0
4	李文芳	南昌大学第一附属医院整形美容科	27	93	5.0	7.0