摘要:
背景:有实验证实口服缬沙坦能降低血管支架置入后血管再狭窄的发生,局部应用缬沙坦能否产生相同的效应且其可能的作用机制需验证.目的:采用缬沙坦涂层支架置入实验兔腹主动脉,观察支架对血管狭窄情况、新生内膜中胶原沉积及AT2受体表达的影响.设计:随机对照动物实验.单位:北京市友谊医院.材料:实验于2004-10/2006-03在北京市友谊医院实验室完成,选用15只新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量2.75~3.2kg,由北京友谊医院动物实验室提供.动物实验室喂养适应1周.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.缬沙坦粉剂由诺华公司馈赠,MASSON染色试剂为北京友谊医院病理科提供,1%天狼星红苦味酸溶液为中日友好医院病理科提供,鼠抗兔AT2单克隆抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品,Envision试剂购自Dako公司,引物由北京赛百盛公司合成.方法:①随机数字表法将实验兔分为裸支架组、载体涂层支架组及药物涂层支架组,每组5只,分别在实验兔腹主动脉的肾动脉开口下方植入裸支架、载体涂层支架及药物涂层支架.②支架置入前后即刻及置入后3个月分别行腹主动脉造影测量腹主动脉直径.③3个月后麻醉处死实验兔.取支架血管段切片并作苏木精一伊红染色,对管腔面积、内外弹力膜围绕面积、新生内膜面积及最大内膜厚度进行测定.④将支架血管段进行MASSON染色,观察胶原沉积情况,天狼星红苦味酸染色进一步观察胶原的类型.⑤免疫组化方法检测AT2受体蛋白质表达,并采用RT-PCR方法测定AT2受体mRNA的表达.主要观察指标:①不同时间腹主动脉直径测定结果.②支架血管段管腔面积、内外弹力膜围绕面积、新生内膜面积及最大内膜厚度.③支架血管段胶原类型及沉积情况.④AT2受体蛋白质及mRNA表达.结果:纳入实验兔15只,裸支架组1只在支架置入过程中死亡,载体涂层支架组1只在饲养过程中死亡,其余13只均进入结果分析.①各组实验兔支架置入前后即刻及术后3个月组间比较结果显示血管直径差异无统计学意义(P>0.05).②缬沙坦组实验兔管腔面积大于裸支架组及载体支架组,差异有显著性意义(P<0.01),新生内膜厚度及新生内膜面积均小于裸支架组及载体支架组,差异有显著性意义(P<0.01).③MASSON染色显示裸支架组及载体涂层支架组新生内膜中胶原大量沉积,缬沙坦洗脱支架新生内膜中胶原沉积较少;天狼星红-苦味酸染色经偏光显微镜下可见生内膜中主要是Ⅲ型胶原沉积,在支架脚附近间或有Ⅰ型胶原的沉积,缬沙坦涂层支架组Ⅲ型胶原沉积明显减少.④裸支架组与载体涂层支架组AT2受体蛋白仅在外膜表达,缬沙坦药物涂层支架AT2受体蛋白自外膜至内膜均有表达,药物涂层支架组AT2受体/β-Actin表达高于载体支架组及裸支架组(P<0.01).结论:缬沙坦涂层支架能通过减少胶原尤其是Ⅲ型胶原的沉积抑制支架术后血管内膜增生,其机制可能与缬沙坦涂层支架上调AT2受体表达有关.