摘要:
目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用.方法:1,采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化.2,用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况.3,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响.4,以Matrigel模拟重建基底膜,用8 μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响.结果:1,与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强.同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加.PCNA表达明显减少(P=0.011).2,采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008).而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象.3,同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.01 1),而与NFs共培养之后.CAOV3的凋亡没有明显变化.4,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8 h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01).⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24 h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01).结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著.这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展.