流式细胞仪碘化丙啶染色法测定类胰岛素生长因子Ⅰ对人胚胎原代及传代成肌细胞生长周期的作用

• 作者: 唐方 岑石强 张峻梅 杨志明 解慧琪
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 类胰岛素生长因子I 成肌细胞 组织工程 流式细胞术 细胞移植 组织工程化食管
• 年，卷（期）: 2008,（16）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3110-3114
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.16.028

摘要

目的:大量研究表明,类胰岛素生长因子I促成肌细胞增殖作用明显,低浓度水平就有活性,但是对于其作用机制目前还不太清楚.应用流式细胞仪碘化丙啶染色法(PI法)检测成肌细胞生长周期,拟探讨类胰岛素生长因子I对原代及传代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖的作用与机制.方法:实验于2004-06/12在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室、干细胞与组织工程研究室以及成都市第三人民医院检验科流式细胞室完成.在产妇知情同意的前提下,选取孕8～12周水囊引产胎儿,性别不限,切取部分小腿腓肠肌与股四头肌组织后,采用文献的方法进行成肌细胞分离、纯化与传代培养,实验经医院伦理委员会批准.选取原代、第2、4、6代成肌细胞以1×105 /孔密度接种于24孔板,每3孔为1组计7组.1～7组细胞以无血清F12培养基同步化后分别予以含0,1,2,4,8,16,32 μg/L类胰岛素生长因子I的培养基,运用核素掺入法确定类胰岛素生长因子I促增殖的适宜浓度用于实验.同步化后其中一板的生长培养基不加类胰岛素生长因子I作为对照组;另一个加入适宜浓度的类胰岛素生长因子I作为实验组.每组每天取3孔细胞计数,绘制生长曲线,推算成肌细胞的群体倍增时间,作为细胞增殖周期TC.运用流式细胞技术PI法分别测定细胞生长周期和各亚周期时相时间.结果:4～8 μg/L 类胰岛素生长因子I具有良好促进成肌细胞增殖的能力.各代的实验组与对照组成肌细胞在24 h后进入对数生长期,各实验组细胞生长曲线明显左移.6代以内成肌细胞的增殖周期、各亚周期细胞百分比、各亚周期所占时相以及各代细胞对类胰岛素生长因子I的反应一致,生长模式与能力一致,细胞倍增时间平均从4.8 d缩短到3.3 d.结论:类胰岛素生长因子I能促进成肌细胞体外增殖,成肌细胞的增殖指数明显提高.其促增殖作用是通过缩短DNA合成前期和合成期来实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐方	成都市第三人民医院检验科流式细胞室	20	130	6.0	10.0
2	张峻梅	成都市第三人民医院检验科流式细胞室	14	74	5.0	8.0
3	岑石强	四川大学华西医院骨科	56	378	12.0	17.0
4	杨志明	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室	101	835	17.0	24.0
5	解慧琪	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室	39	288	9.0	16.0