针对p27Kip1基因的小发夹RNA对牛角膜内皮细胞增殖的影响

• 作者: 周龚莉 姜冬玲 张光红 张明昌 王勇 范可顺 黄渝侃
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA,小分子干扰 周期素依赖激酶抑制剂p27 质粒 内皮,角膜 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 254-259
• 页数: 6页
• 分类号: R77
• 字数: 4857字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2009.03.014

摘要

目的 探讨针对p27Kip1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒对牛角膜内皮细胞(bCEC)增殖能力的影响.方法 实验研究.设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照.构建并鉴定重组质粒Pgenesil-P1、Pgenesil-P2、Pgenesil-P3及Pgenesil-HK.以脂质体法将以上4种质粒分别转染bCEC,并设立空白组.稳定转染后采用RT-PCR和Western免疫印迹法榆测bCEC内p27Kip1的mRNA及其蛋白水平,筛选出抑制效果最好的阳性siRNA质粒.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测该质粒组、Pgenesil-HK组及空白组的细胞生长情况.流式细胞术检测各组细胞周期的分布.以上数据结果均采用单因素方差分析.结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功.与空白组比较,Pgenesil-P1、Pgenesil-P2、Pgenesil-P3各组mRNA的抑制效率分别为32.71%、67.76%及80.28%(F=453.102,P=0.000),蛋白表达水平降低为29.27%、64.73%及76.13%(F=75.385,P=0.000),以Pgenesil-P3抑制效果最明显.空白组与Pgenesil-HK组比较蛋白水平(P=0.356)和mRNA水平(P=0.246)均差异无统计学意义.与空白对照和阴性siRNA相比,Pgenesil-P3组bCEC增殖能力提高,G1期细胞比例下降(F=134.224,P=0.000),s期比例增加(F=334.957,P=0.000).结论针对p27Kip1的shRNA可有效降低p27Kip1基因及其蛋白的表达水平,并可提高bCEC增殖能力.RNA干扰介导的p27Kip1基因沉默可能是促进角膜内皮细胞再生的有效手段.(中华眼科杂志,2009,45:254-259)

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张明昌		109	492	11.0	18.0
2	姜冬玲		6	6	2.0	2.0
3	王勇		38	171	9.0	11.0
4	黄渝侃		23	130	5.0	11.0
5	范可顺		3	7	2.0	2.0
6	张光红		3	7	2.0	2.0
7	周龚莉		1	2	1.0	1.0