靶向性Fas基因转导卵巢癌细胞系SKOV3的实验研究

• 作者: 丁西来 何维 吴鸣 杨佳欣 沈铿
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Fas 卵巢肿瘤 肿瘤特异启动子
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 600-603
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 2712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-6611.2009.07.007

摘要

目的 为了解决Fas基因转导中靶向性差的问题,在基因上游插入人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子,构建真核表达质粒,了解其对Fas表达的提高程度. 方法 将Fas基因自质粒pcDNA3/Fas中用限制性内切酶KpnⅠ和XbaⅠ切出,插入到KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后的载体pAd/TERT中hTERT启动子的下游,构建pAd/TERT-Fas,并进行酶切鉴定和测序鉴定.然后转染pAd/TERT-Fas、pAd/TERT和pcDNA3/Fas到低表达Fas的SKOV3,并命名为T-F、T和F.对转染克隆细胞进行逆转录PCR、实时PCR、Western免疫印迹和流式细胞分析,了解Fas基因在mRNA和蛋白水平的表达情况. 结果 质粒pAd/TERT-Fas经酶切及测序鉴定构建成功.转染SKOV3鉴定结果 如下:实时聚合酶链反应中T-F的循环阈值(cycle threshold,CT)值为29,F的CT值为31.4,T和未转染SKOV3不表达Fas;Western免疫印迹结果 显示在F和T-F组Fas蛋白有表达,T-F组表达明显强于F组;流式细胞分析Fas在未转染SKOV3、T、F、T-F组分别为1.1%,4.9%,10.9%,15.1%. 结论 本研究成功构建真核表达质粒pAd/TERT-Fas,并转染SKOV3,结果 显示hTERT启动子可提高Fas表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨佳欣	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科	39	294	8.0	16.0
2	沈铿	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科	100	1431	16.0	36.0
3	吴鸣	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科	36	633	10.0	25.0
4	何维	中国医学科学院北京协和医学院免疫室	46	200	7.0	12.0
5	丁西来	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科	2	1	1.0	1.0