尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达

• 作者: 刘振杰 邱峰 陈富
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 尿激酶型纤溶酶原激活因子 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 389-391
• 页数: 3页
• 分类号: R698.2
• 语种: 中文

摘要

目的 构建尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21中表达,为进一步研究uPA奠定基础.方法 应用逆转录RT-PCR,从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列,与原核表达质粒pET32a重组,获得表达质粒uPA-pET32a.用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序进行鉴定,用IPTG诱导表达,并用Western blotting进行鉴定.结果 从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296 bp,酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为68900Mr,经Western blotting证实为目的蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒uPA-pET32a.并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致,为进一步的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱峰	广东省中医院检验科	27	136	7.0	10.0
2	刘振杰	广东省中医院检验科	52	229	8.0	14.0
3	陈富	广东省中医院检验科	25	69	4.0	6.0