猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建

• 作者: HE Ming-lei 刘思国 刘慧芳 司薇 杜艳芬 杨金国 王春来 王聃 赫明雷
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆茵 转座子 信号标签
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 细菌
• 页码范围: 38-44
• 页数: 7页
• 分类号: S852.619
• 字数: 3462字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2009.01.007

摘要

本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系.利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证.结果表明,经过加入标签的MinI-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.COliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株.这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础.