脐带血造血干细胞采集、分离和冷冻保存研究

• 作者: 丁利 刘会兰 刘忠 吕蓉 周学勇 孙自敏 方勤 李敏 杨红友 郭晓睫
• 来源期刊: 中国科技成果
• 学科: 医学
• 关键词: 脐带血 干细胞 低温保存
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 创新交流
• 页码范围: 47-49
• 页数: 3页
• 分类号: R71
• 字数: 3009字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3772/j.issn1009-5659.2009.01.016

摘要

目的:优化脐带血造血干细胞采集、分离和冷冻保存的方法,初步探讨建立脐带血造血干细胞库的系统方法.方法:运用抗凝、密闭式血袋无茵采集符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿脐带血,进行相应的微生物项目检测及HLA分型检测,采用二次回浆再提取的方法分离制备脐带血有核细胞(NC),并通过对不同的降温速率优化脐带血造血干细胞的冷冻保存及复温方法,对复温后的脐带血造血干细胞进行计数及活性检测.结果:共收集脐带血49份,筛选并冷冻保存了26份,所收集的脐全血体积124.6±26.27ml,Nc总数(1.64±0.94)×109;分离后脐血体积25.77±1.45ml,NC总数(1.52±0.89)×109,回收率为(92.12±5.78)%.分离前后细胞活性台盼蓝拒染率分别为(96.8±1.14)%和(95.7±1.63)%冻融前后NC总数分别为(2.1 6±0.79)×109和(1.97±0.95)×109,NC回收率(92.97±7.53)%,台盼蓝拒染率分别为95.7%和96%,CD34+细胞数分别为(8.02±4.61)×106和(6.89±4.15)×106,CD34+细胞回收率(85.36±3.27)%,粒单系细胞集落形成单位(CFU-GM)回收率(91.45±5.44)‰脐血造血干细胞在冷冻保护剂和复苏方法相同而降温速率不同的情况下,4℃～40℃时采用1℃/min的降温速率优于5℃/min的降温速率,-40℃～-90℃时采用1℃/min或5℃/min的降温速率以及在置-196℃液氮保存前-40℃降至-90℃或降^至-130℃之间,结果均无显著性差异.结论:优化的脐带血遣血干细胞采集,分离和冷冻保存的方法,造血干细胞回收率高,可以满足普通病人造血干细胞移植的需求.