BF2/肽四聚体的构建及其在特异性T细胞检测上的应用

• 作者: 刘光亮 吴东来 孟庆文 王群 白宇 童铁钢 肖一红
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: BF2/肽四聚体 传染性支气管炎病毒 核蛋白 特异性T细胞
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 12-17
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 4944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.01.003

摘要

为构建可溶性鸡组织相容性复合体(MHC) Ⅰ类分子(BF2)/肽复合物,大量表达并纯化了可生物素化的MHC Ⅰ类分子重链(BF2-BSP)和轻链(Chβ2m),并合成了鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白N71～78T细胞表位肽,将其与纯化后的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在重折叠缓冲液中复性.复性后在快速蛋白液相色谱仪(FPLC)上分离出复性组装成功的BF2/肽单体复合物.将该单体复合物在体外进行生物素化,其产物再次采用FPLC通过分子筛分离出生物素化后的BF2/肽单体复合物;然后将生物素化后的BF2/肽单体复合物与藻红蛋白(PE)标记的链霉亲和素按一定比例反应生成BF2/肽四聚体.为了检测所制备BF2/肽四聚体是否能应用于检测特异性T细胞,从感染IBV H52株10 d后的SPF鸡分离外周血单核细胞(PBMC),染色后采用流式细胞术检测,结果表明,所制备的BF2/肽四聚体可用于检测IBVN蛋白特异性T淋巴细胞,检测1周龄SPF鸡接种H52后10d时针对N蛋白的特异性T细胞比率为3.65%.