负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体的制备和鉴定

• 作者: 何贤辉 徐丽慧 施焕敬 欧阳东云 王笑迎 郭贺 高琦
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 恒河猴 Mamu-B*1703 猴免疫缺陷病毒 四聚体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 349-354
• 页数: 6页
• 分类号: R392.3
• 字数: 4775字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2009.04.001

摘要

目的:制备负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体.方法:以含Mama-B*1703重链cDNA序列的pMD19-T克隆为模板,通过PCR的方法克隆Mama-B*1703重链基因,进而构建羧基端融合生物索化酶BirA底物肽(BSP)的Mamu-B*1703重链胞外域融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达.β微球蛋白、SIV抗原肽共存时,通过稀释法复性可溶性Mamu-B*1703单体,经生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合形成四聚体.结果:ELISA检测显示获得具有正确构象的负载SIV抗原肽的Mamu-B-1703四聚体.结论:印度恒河猴Mamu.B}1701特异性抗原肽IW9,与中国恒河猴的Mamu-B*1703相结合形成可溶性Mamu-B*1703/IW9单体和四聚体.