梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定

• 作者: 于清龙 刘冬光 刘颖 廖娟红 杨利国 熊家军 郭爱珍 陈焕春
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 梅花鹿 γ干扰素 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S858.9|S852.4
• 字数: 4231字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2009.11.001

摘要

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达.表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%.用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定.