肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用

• 作者: 傅强 李慧明 王慧萍 王煜非 陈霞芳 韦芳 黄倩
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 条件复制型腺病毒载体 HSV-1TK基因 甲胎蛋白基因启动子 甲胎蛋白基因增强子 病毒-基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 113-119
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7|R730.54
• 字数: 5277字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2009.02.003

摘要

目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用. 方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用. 结果:成功构建的腺病毒载体 Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)% (P<0.01).结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景.