VEGF靶向RNA干扰质粒构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞的影响

• 作者: 侯亚义 华子春 施佩花 泥艳红 王志勇 胡勤刚 韩伟 黄晓峰
• 来源期刊: 口腔医学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 口腔鳞状细胞癌 血管内皮生长因子 RNA干扰 质粒
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 124-128
• 页数: 5页
• 分类号: R739.86
• 字数: 3935字
• 语种: 中文

摘要

目的:用RNA干扰技术阻断人舌鳞癌系Tca8113细胞中VEGF基因的表达,观察细胞增殖及凋亡特征.方法:检测人舌鳞癌系Tca8113细胞中血管内皮生长因子VEGF表达水平;采用真核转录质粒pRNA-U6.1/Neo构建针对VEGF基因的重组转染质粒.将4种不同序列的VEGF-shRNAV1、VEGF-shRNAV2、VEGF-shRNAV3、VEGF-shRNAV4质粒以及含与VEGF无关序列的VEGF-shRNAVc和空白质粒VEGF-shRNAU6分别转染Tca8113细胞,48 h后检测其VEGF表达水平,筛选稳定转染RNAi-VEGF的细胞;CCK8检测其增殖能力;流式细胞仪检测其细胞周期;Anexin-V-PI检测其凋亡特征.结果:RT-PCR和Western blot检测:Tca8113细胞阳性表达VEGF;用Lipofectamine 2000成功将不同VEGF片段的质粒转染入Tca8113细胞;RT-PCR发现,VEGF-shR-NAV2组细胞VEGF表达被显著抑制,用400 ng/mL G418压力筛选获得VEGF稳定被抑制的细胞系;CCK8检测各组Tca8113细胞增殖见VEGF-shRNAV2组增殖能力小于VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组;转染VEGF-shRNAV2的Tca8113细胞G0-G1期细胞较VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组高,且细胞凋亡多.结论:用RNA靶向干扰能明显降低人舌鳞癌Tca8113细胞内VEGF的表达并抑制肿瘤细胞增殖及促进凋亡.