改良的碱裂解法提取动物细胞附加体DNA

• 作者: 储斌 周海胜 周青 张胜权 汪渊 沈继龙 秦宜德
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒 DNA
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 208-212
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 3456字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.02.017

摘要

目的 利用一种快速、简便的方法 提取动物细胞附加体DNA.方法 通过电转移的方法介导pEGFP-N1转染小鼠成纤维细胞NIH3T3和中国仓鼠卵巢癌细胞CHO等细胞系.转染后48 h,收集转染细胞.用STET缓冲液重悬细胞,加入碱裂解液裂解细胞,再用7.5 mol/L醋酸胺中和.离心收集上清,用1∶1酚/氯仿抽提2次,氯仿抽提1次,乙醇沉淀附加体DNA.TE溶解DNA.提取的DNA通过PCR和southern blot方法进行分析.结果 PCR和Southem blot结果证实利用改良的碱裂解法可以从动物细胞提取附加体DNA.结论 利用简便快速的碱裂解法可以提取哺乳动物细胞附加体DNA.