5-Aza诱导BMSC分化为心肌细胞的分子生物学检测

• 作者: 刘昌菊 封纪武 李兴芳 柏学进 董雅娟 龚宜超
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷 心肌细胞
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 2539-2545
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文

摘要

[目的]利用分子生物学方法探讨5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza)体外诱导牛骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)向心肌细胞的分化,为转基因良种肉牛培育提供种子细胞,提高转基因效率.[方法]利用获取的纯化稳定的P4、P8、P12代BMSC各经5、10、15 μmol·L-1的5-Aza进行体外诱导分化,统计并计算心肌细胞的转化率,对诱导出现的心肌样细胞进行形态学观察和RT-PCR鉴定.[结果]诱导后细胞大多呈现梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成.相同代数的BMSC在10 μmol·L-1的5-Aza作用下诱导效果最佳;在相同浓度的5-Aza作用下,BMSC向心肌细胞的转化率随着传代次数的增加逐渐降低.RT-PCR显示诱导分化后的细胞明显表达心肌细胞的4种特异性基因,分别是α-心脏肌动蛋白(378bp)、结蛋白(601 bp)、心脏肌钙蛋白T(331 bp)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)(273 bp).[结论] 5-Aza体外可诱导牛骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞;利用P4代BMSC在10 μmol·L-1的5-Aza的作用,诱导效果明显.