TGFβ1shRNA靶向抑制离体胎鼠肺成纤维细胞TGFfβ1基因表达

• 作者: 任建兵 刘海英 柳国胜 王志军 罗瑶
• 来源期刊: 暨南大学学报(自然科学与医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子β1 RNA干扰 肺成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 644-648
• 页数: 5页
• 分类号: R587.1|R322.1
• 字数: 3290字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2009.06.015

摘要

目的:探讨自行设计的TGFβ1shRNA对离体胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1基因表达的干扰作用,为研究纤维化病变的基因治疗提供技术基础和依据.方法:原代培养胎鼠肺成纤维细胞,并建立细胞高氧损伤模型.针对大鼠TGFβ1基因mRNA序列,设计、合成携带3条TGFβ1shRNA绿色荧光蛋白融合表达质粒载体,并设阴性质粒组和空白组为对照,通过JetPEI包裹分别转染上述高氧损伤的胎鼠肺成纤维细胞.转染后24、48和72 h收集细胞,在荧光显微镜下观察干扰效果,采用实时荧光定量PCR检测TGFβ1基因表达情况,并计算干扰效率.结果:①成功培养胎鼠肺成纤维细胞,并建立细胞高氧损伤模型;②荧光显微镜下观察,可见转染后24、48和72 h TG-Fβ1shRNA质粒组细胞绿色荧光强度均明显弱于阴性质粒组细胞,空质粒载体组未产生绿色荧光;荧光定量PCR检测转染后胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1 mRNA表达量,转染后24、48和72 hTGFβ1shRNA质粒组TGFβ1 mRNA表达量均显著低于阴性质粒组(P<0.01),其基因干扰效率则依次递减,分别为97.3%、96.9%和71.7%.结论:本研究证明自行设计的TGFβ1shRNA转染胎鼠肺成纤维细胞后24、48和72 h均能够高效干扰TGFβ1基因的表达,其基因干扰效率呈现一定的时间依赖性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳国胜	暨南大学附属第一医院儿科	116	770	15.0	23.0
2	罗瑶	暨南大学附属第一医院儿科	7	41	4.0	6.0
3	王志军	暨南大学附属第一医院儿科	4	10	2.0	3.0
4	任建兵	暨南大学附属第一医院儿科	4	12	3.0	3.0
5	刘海英	暨南大学附属第一医院儿科	7	30	3.0	5.0