18S rRNA基因巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫分离株

• 作者: 冯耀宇 刘晖 曹建平 沈玉娟 袁忠英
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 牛隐孢子虫 安氏隐孢子虫 18S rRNA基因 巢式 PCR-RFLP
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 115-118
• 页数: 4页
• 分类号: R382.3
• 字数: 2543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.02.006

摘要

目的 18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫.方法 改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA软件进行同源性和系统发育分析.同时扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切,且XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后进行RFLP分析.结果 通过18S rRNA基因分析,SH-BOV与1株巴西牛隐孢子虫Cryptospridium bovis同源性为100%,种系发育树上两者在同一分支;XZ-BOV与安氏隐孢子虫C. andersoni同源性为99%,种系发育树上两者在同一分支.扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切后,可鉴别出SH-BOV为C. bovis,XZ-BOV为C. andersoni或C. muris.XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后可鉴别出XZ-BOV为C. andersoni.结论 上海株牛源隐孢子虫(SH-BOV)鉴定为牛隐孢子虫(C. bovis),徐州株牛源隐孢子虫(XZ-BOV)鉴定为安氏隐孢子虫(C. andersoni).