安氏隐孢子虫ITS-1基因PCR检测方法的建立

• 作者: 唐林生 彭昊 李军 杨威 禤雄标 胡帅 许力干 谢永平 陈泽祥 陶立 马春霞 魏晓瑞
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 安氏隐孢子虫 ITS-1基因 PCR检测 巢式PCR
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 701-704
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2012.05.701

摘要

[目的]建立针对安氏隐孢子虫的PCR快速检测方法,为安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查提供技术支撑.[方法]根据GenBank中安氏隐孢子虫的ITS-1基因序列设计1对特异性引物,建立基于ITS-1基因的PCR方法,并通过特异性试验、敏感性试验、临床检测以及与经典巢式PCR检测方法进行比较等,验证其可行性.[结果]基于ITS-1基因的PCR检测方法能扩增出安氏隐孢子虫的特异条带,而对猪源隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫、牛泰勒氏虫、牛巴贝斯虫、伊氏锥虫、食道口线虫的扩增结果均为阴性；将测序结果进行BLAST比对,发现其与GenBank中安氏隐孢子虫的同源性均在99％以上.敏感性最低可检测每克牛粪中5个卵囊；用于检测广西不同地区的1613份牛粪样品时,与经典巢式PCR检测方法相比,发现两者的阳性检出率均为11.72％,且吻合率达100％.[结论]安氏隐孢子虫ITS-i基因PCR检测方法具有快速、敏感、特异的特点,适用于安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查分析.