安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白的原核表达及其免疫原性研究

• 作者: 唐林生 彭昊 李军 杨威 许力干 谢永平 陈泽祥 陶立 黄维义
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 安氏隐孢子虫 卵囊壁蛋白 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1870-1875
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.10.1870

摘要

[目的]验证安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白(COWP)的免疫原性,为建立安氏隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定基础.[方法]根据GenBank已公布的安氏隐孢子虫COWP同源基因序列(DQ060431)设计引物,克隆COWP基因并构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后,采用蛋白印迹法检测其免疫原性.[结果]扩增获得的COWP基因片段为549bp,其序列与GenBank已公布CO WP同源基因序列(DQ060431)的同源性达100％,将其插入pET-32a载体可构建pET-32a-COWP表达载体.重组菌在30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导5h后,其表达形式以可溶性表达为主;NTA-Ni亲和层析柱层析时用200 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,即能得到纯化的重组蛋白,重组蛋白分子量约40 kDa.以抗His标签鼠单克隆抗体或鼠抗安氏隐孢子虫高免血清为一抗进行Western blotting检测,均能获得预期的目的条带.[结论]重组COWP蛋白具有良好的免疫原性,可作为安氏隐孢子虫病免疫学诊断的候选抗原.