猴痘病毒E2L蛋白的表达、纯化及免疫原性评价

• 作者: 贾梦乐 熊嘉琦 杨领弟 王毅豪 孙静婷 王婷 黎美凤 孔令保 彭棋 江西农业大学生物科学与工程学院/南昌市动物病毒与基因工程重点实验室/江西农业大学病原微生物研究所
• 来源期刊: 南方农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猴痘病毒 E2L蛋白 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2024,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 241-248
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

【目的】构建猴痘病毒E2L蛋白原核表达载体，经诱导表达及纯化鉴定后免疫接种昆明小鼠评价其免疫原性，为猴痘病毒诊断试剂、疫苗和特异性治疗药物的研发打下基础。【方法】根据GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列优化密码子后合成E2L基因，将其克隆至表达载体pET-28a（+）上构建原核表达载体pET-28a-E2L，然后转化大肠杆菌BL21(DE3)受态细胞，采用控制变量的方法对融合蛋白最佳诱导表达条件进行优化，通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。融合蛋白经His-Bind柱亲和层析纯化后，经腹腔注射免疫昆明小鼠，从免疫当天（第0 d）开始每隔7 d通过断尾法采集昆明小鼠血清1次，采用ELISA检测血清抗体效价。【结果】以构建的原核表达载体pET-28a-E2L转化BL21(DE3)受态细胞后，经IPTG诱导，能成功表达获得融合蛋白E2L，且主要以包涵体的形式进行表达。融合蛋白E2L的最佳诱导表达条件为40℃下以1.0 mmol/L IPTG诱导16 h，通过His-Bind柱亲和层析纯化时的最佳咪唑洗脱浓度为100 mmol/L。昆明小鼠免疫试验结果表明，纯化后的融合蛋白E2L能诱导昆明小鼠产生较高水平的体液免疫，至免疫第42 d昆明小鼠血清仍然维持较高抗体水平，抗体效价高达1∶70400，说明融合蛋白E2L具有良好的免疫原性。【结论】猴痘病毒E2L蛋白在原核表达系统能实现高效表达，且以纯化后的融合蛋白E2L免疫昆明小鼠能产生较强的体液免疫，表明具有良好的免疫原性，可用于新型猴痘病毒检测方法及预防疫苗的研发。