重组禽呼肠孤病毒S1133 σ3基因表达及其免疫原性研究

• 作者: 刘加波 庞耀珊 彭宜 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 禽呼肠孤病毒 S1133毒株 σ3基因 重组质粒 免疫原性
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1223-1226
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2012.08.1223

摘要

[目的]构建禽呼肠孤病毒(ARV)S1133 σ3基因的真核重组质粒,研究其表达蛋白的免疫原性,为研发ARV基因疫苗奠定基础.[方法]采用RT-PCR对ARV S1133毒株的σ3基因进行RT-PCR扩增,扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接后,转化大肠杆菌DH5α,然后提取重组质粒的DNA,经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化.以阳性重组质粒pcDNA3.1-σ3免疫7日龄SPF雏鸡,同时设灭活S1133、表达σ3蛋白及生理盐水对照,二次加强免疫两周后,采用Western blotting检测鸡群血清抗体；并用S1133毒株进行攻毒,4 d后进行ARV检测.[结果]重组质粒pcDNA3.1-σ3的双酶切和RT-PCR扩增鉴定结果一致,均能扩增出约999 bp目的条带；免疫攻毒试验结果表明,pcDNA3.1-σ3处理、灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7.4％、3.7％、11.1％和29.6％,pcDNA-σ3处理与生理盐水处理的差异显著(P＜0.05),但与灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理的差异不显著(P＞0.05)；病毒检出部位最高是关节,其次是胸腺和肾脏,胸腺检出率为零.[结论]真核表达ARV S1133 σ3蛋白具有较好的免疫保护,可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验.