禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 张云 耿宏伟 郝雪 郭东春
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽呼肠孤病毒 σB基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 407-411
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.4|Q786
• 字数: 3758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.05.009

摘要

采用RT-PCR方法扩增禽呼肠孤病毒(ARV)99G株σB编码基因,序列分析表明,99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90%～99 9%,而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60%;用BarnH Ⅰ和Xho Ⅰ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-σB;鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白的41.46%,融合蛋白的分子质量为66 ku,主要以包涵体形式存在;Western-blot结果显示,该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应,表明重组蛋白具有良好的反应原性,可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制.