肝片吸虫CatB4蛋白分子特征及其免疫原性分析

• 作者: 乔军 孟庆玲 张凯 张国武 才学鹏 王熙凤 贡莎莎 黄运福
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 肝片吸虫 组织蛋白酶B4(CatB4) 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 158-164
• 页数: 7页
• 分类号: S852.735
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.01.23

摘要

[目的]明确肝片吸虫组织蛋白酶B4(CatB4)的分子特征及其免疫原性,为研究肝片吸虫CatB4蛋白的生物学特性及揭示其致病机理提供科学依据.[方法]通过RT-PCR扩增肝片吸虫CatB4基因,利用在线分子生物信息学软件对CatB4基因及其编码蛋白进行分子特征分析;构建原核表达载体pET-CatB4,经IPTG诱导获得融合蛋白后进行SDS-PAGE和Western blotting检测分析;并以融合蛋白CatB4免疫小鼠制备多克隆抗体,利用免疫组化对融合蛋白在肝片吸虫体内的表达进行定位分析.[结果]肝片吸虫CatB4基因片段为699 bp,其编码蛋白等电点(pI)7.95,理论分子质量25.89 kD,无信号肽和跨膜区,属于非分泌性蛋白;CatB4蛋白存在10个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化位点和7个N-肉豆蔻酰化位点,有9个抗原决定簇,具有高度保守的CatB结构域,是由无规则卷曲连接9个α-螺旋和8个β-折叠构成其空间结构.基于CatB4基因核苷酸序列同源性构建的系统发育进化树显示,肝片吸虫和大片吸虫聚为一支,二者的同源性为83.98％.SDS-PAGE检测和Western blotting分析结果均显示在41.80 kD处能检测到目的条带.以纯化融合蛋白CatB4与弗氏佐剂乳化后免疫的小鼠均可产生特异性抗体,证实融合蛋白CatB4具有较强的免疫原性;免疫组化定位分析结果显示,在肝片吸虫的卵黄腺腺体细胞、排泄管上皮细胞、肠道上皮细胞和卵黄腺管上皮细胞均发生特异性的抗原抗体反应,呈深棕色.[结论]诱导表达获得的融合蛋白CatB4可特异性识别绵羊肝片吸虫阳性血清,具有较强的免疫原性,且主要在肝片吸虫分泌排泄组织器官中表达,说明CatB4蛋白具有作为肝片吸虫候选抗原的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	才学鹏	中国农业科学院兰州兽医研究所	141	790	15.0	21.0
2	乔军	石河子大学动物科技学院	103	346	8.0	14.0
3	孟庆玲	石河子大学动物科技学院	77	254	7.0	13.0
4	王熙凤	石河子大学动物科技学院	8	5	1.0	1.0
5	贡莎莎	石河子大学动物科技学院	18	18	2.0	3.0
6	黄运福	石河子大学动物科技学院	8	6	1.0	1.0
7	张凯	石河子大学动物科技学院	6	7	2.0	2.0
8	张国武	石河子大学动物科技学院	5	3	1.0	1.0