结核分枝杆菌特异性分泌蛋白的原核表达、纯化和免疫原性分析

• 作者: 刘忠泉 古淑香 张宗德 张继增 李自慧 杜博平 贾红彦 邢爱英 郑晓静 陈曦
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 结核分枝杆菌 rv1837c基因 rv3803c基因 Rv1837c重组蛋白 Rv3803c重组蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 396-402
• 页数: 7页
• 分类号: R378.91+1|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2009.04.003

摘要

目的 构建结核分枝杆菌rv1837c、rv3803c基因原核表达重组质粒,进行表达、纯化,并分析其免疫原性.方法 PCR扩增结核分枝杆菌H37Rv rv1837c、rv3803c基因,并克隆入pTA2质粒.测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c重组体.然后转化入表达宿主大肠杆菌B121(DE3),经0.4 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导;分别与组氨酸标签单克隆抗体及结核患者血清进行Western blot,鉴定Rv1837c、Rv3803c重组蛋白.经镍离子螫和氮川乙酸-组氨酸标签亲和树脂纯化,将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,取兔血清与纯化蛋白通过Western blot方法,检测家兔血清中的抗体.结果 pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c重组体表达相对分子质量为92000及38 000的重组蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量分别占全菌蛋白质的30%及50%.获得纯度为90%的重组蛋白.纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的 蛋白,有较强的免疫原性.结论 成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c,并获得Rv1837c及Rv3803c重组蛋白,为血清学诊断活动性结核病奠定了基础.