猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

• 作者: 刘畅 刘运超 崔颖磊 张改平 杨棋 王冬雨 魏蔷
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E2蛋白 蛋白质纯化 血清学分析 免疫原性
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧· 兽医
• 页码范围: 128-133,143
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 字数: 5291字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.03.025

摘要

为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白,在大肠杆菌中表达E2蛋白,并对其进行纯化及免疫原性分析.将E2基因插入原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-E2,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性E2蛋白.对IPTG浓度及诱导温度和时间进行优化,结果显示,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时,18 ℃条件下诱导表达16 h,E2蛋白的可溶性表达量最高.通过分子筛一步纯化E2蛋白,其终质量浓度为0.5 g/L.Western blot分析和间接ELISA结果显示,纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下都能够被猪瘟阳性血清特异性识别,表明纯化后的E2蛋白活性良好.将纯化后的E2蛋白添加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠,采集血清进行病毒中和试验,结果显示,免疫后56 d 产生较高水平的中和抗体,表明E2蛋白免疫原性良好.综上,成功利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了可溶性E2蛋白,且纯化后的E2蛋白免疫原性良好.