胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用

• 作者: 吴文溪 孙茂才 朱正才 沈历宗 王建平 黄一鸣
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胞嘧啶脱氨酶基因 点突变 自杀基因治疗 结肠肿瘤
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 595-599
• 页数: 5页
• 分类号: R735.3~+5|R730.54
• 字数: 3728字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2009.06.008

摘要

目的:构建大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶(E. coli cytosine deaminase,EC-CD)基因突变体D314A(即EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸)并研究其抗肿瘤作用.方法:构建含EC-CD基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CD~(wt),应用点突变技术将pcDNA3.1-CD中EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸的碱基由A突变为C,即构成pcDNA3.1-CD~(D314A).用Lipofectamine ~(TM) 2000将EC-CD基因或D314A基因转入人结肠癌细胞系LoVo细胞,以G418筛选出稳定表达的阳性克隆LoVo-CD~(wt)及LoVo-CD~(D314A).应用MTT法检测EC-CD基因及D314A基因对LoVo细胞的直接杀伤作用及旁观者效应.结果:成功构建EC-CD基因突变体D314A并经测序确认.LoVo细胞转染EC-CD基因及D314A基因后均能表达相应的mRNA,Lovo-CD~(D314A)细胞对5-FC的IC_(50)为(85.13±0.60)mmol/L,显著低于LoVo-CD~(wt)细胞的(689.76±0.45)μmoL/L,(P=0.000);在旁观者试验中,当LoVo-CD~(wt)细胞和LoVo-CD~(D314A)细胞比例均为30%时,细胞存活率分别为(48.5±0.49)%与(17.3±0.40)%(P=0.000).结论:EC-CD基因突变体D314A的抗LoVo细胞作用显著强于野生型EC-CD基因,有望成为新的肿瘤基因治疗候选基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴文溪	南京医科大学第一附属医院普通外科	112	720	13.0	21.0
2	沈历宗	南京医科大学第一附属医院普通外科	91	635	14.0	20.0
3	王建平	南京医科大学第一附属医院普通外科	30	68	4.0	7.0
4	孙茂才	南京医科大学第一附属医院普通外科	14	35	4.0	5.0
5	朱正才	南京医科大学第一附属医院普通外科	3	12	2.0	3.0
6	黄一鸣	南京医科大学第一附属医院普通外科	2	6	1.0	2.0