猪圆环病毒2型ORF2截短基因片段真核表达载体的构建及其DNA疫苗的免疫效果

• 作者: 侯韶毅 兰家暖 冯励 刘芳 张宁 李军 李茂宁 谢丽华 韦英益 黄伟坚
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 ORF2截短基因 真核表达 重组质粒 免疫效果
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 327-332
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 4412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.04.009

摘要

为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段核酸疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,用PCR方法扩增出ORF2基因及其截短基因共8个片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],将其插入pcD-NA3.0栽体中,成功构建了pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H.将纯化后的真核表达质粒转染PK-15细胞后,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的瞬时表达情况.分别用单独免疫和组合免疫的方法免疫小鼠,每只0.15 mg,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中的抗体效价,并分析这两种方法的免疫效果.结果显示,6个片段较短的重组质粒(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)转染的细胞中均有明显且较亮的荧光出现,而2个片段较长的重组质粒(pcDNA-A、pcDNA-H)及空载体pcDNA3.0转染的细胞中没有荧光出现.在单独免疫组中,这8个片段的真核表达质粒都能刺激机体产生特异性抗体,其中片段较短的pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E的免疫效果比较理想;在组合免疫中,除pcDNA-C-F外,各个真核表达质粒都能产生较高水平且稳定的抗体,其中pcDNA-D-H、pcDNA-B-F的免疫效果最好.表明组合免疫要比单独免疫的效果好.