小鼠脑脊髓炎病毒标准血清制备及间接ELISA检测方法的应用

• 作者: 丛喆 乔红伟 佟巍 侯丽波 王卫 蒋虹 谢军芳 魏强
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV) 标准血清 ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5-9,彩插2
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 字数: 4106字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2009.12.002

摘要

目的 制备小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)标准血清,建立ELISA检测方法,实现一种病毒多种检测方法的比对研究.方法 用TMEV感染3周龄SPF级BALB/c小鼠,制备免疫用抗原.分别在0、7、14 d以腹腔注射的方式免疫SPF级6～8周龄BALB/c小鼠,免疫血清用IFA、IEA法进行鉴定;TMEV感染 BHK-21细胞,制备ELISA抗原,确定酶结合物、抗原和标准阳性血清的最佳工作浓度,建立TMEV ELISA检测方法,进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验.结果 制备TMEV免疫血清,以IFA、IEA测定血清效价分别为1:640和1:320,与痘苗病毒、小鼠肺炎病毒、小鼠肝炎病毒、仙台病毒和呼肠孤病毒-Ш型均无交叉反应;建立了ELISA检测方法,确立了各种试剂的最佳工作浓度,其中酶结合物最佳工作浓度为1:10000,抗原为2.5 μg/mL,阳性参考血清为1:200;ELISA检测灵敏度为1:3200.板内特异抗原、正常抗原平均变异系数为4.67%和5.7%,板间为4.39%和7.61%.稳定性实验相对偏差均小于20%.结论 本研究制备的TMEV免疫血清可作为血清学检测方法中的标准质控血清;建立的ELISA方法重复性、稳定性好,敏感性和特异性强,可用于小鼠脑脊髓炎病毒血清抗体检测.