H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/duck/FuJian/01/02株反向基因操作系统的建立

• 作者: 希尼尼根 樊树芳 温峰琴 索永兵 邓国华 陈化兰
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: H5Nl 禽流感病毒 反向遗传 生物学特性
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 393-397
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3128字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.03.006

摘要

从含A/duck/FuJian/01/02(W-DKFJ)株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS全基因片段,将其分别克隆至PBD载体中.利用8质粒反向遗传操作系统,将重组的PBD质粒共转染293T细胞,成功拯救了该病毒.并命名为R-DKFJ.10(6)EID(50)的W-DKFJ和R-DKFJ分别经鼻腔接种BALB/c小鼠后,观察到两组小鼠体重均明显下降,并且在10d之内全部死亡.与此同时,在感染小鼠后第3天在脑、脾、肾、肺脏等脏器巾分离到病毒,两组小鼠肺脏病毒含量分别为7.4±0.4和7.1±0.1.其MLD(50)分别为O.5log(10)EID(50)/ML和0.98lOg(10)EID/mL.结果表明,救获病毒R-DKFJ与其亲本野生毒W-DKFJ在对哺乳动物模型BALB/c小鼠致病性方面保持着一致的生物学特性.