鼠胰岛素样生长因子-1重组腺病毒的构建及其在胰岛β细胞的表达

• 作者: 李堂 王桂琴 胡素娟 陈志红
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛素样生长因子-1 腺病毒 胰岛β细胞 基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1067-1071
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 语种: 中文

摘要

构建含有鼠胰岛素样生长因子1(rIGF-1)重组腺病毒,研究其在胰岛β细胞的表达.Trizol 一步法提取大鼠肝脏组织总RNA,RT-PCR法合成鼠胰岛素样生长因1(rIGF-1) cDNA;PCR纯化产物和pAdTrack-CMV分别经BglⅡ和EcoRⅤ双酶切后纯化,T4 DNA 连接酶连接,转化JM109感受态细菌,卡那霉素平板筛选阳性克隆扩增培养,抽提质粒;经BglⅡ和EcoRⅤ双酶切及测序鉴定后,将正确重组体pAd-CMV-rIGF-1转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染293细胞,获得重组腺病毒Ad-rIGF-1,病毒滴度为4.0×10 8 pfu/ml.Ad-rIGF-1感染大鼠胰岛β细胞株-RINm5F细胞,RT-PCR法对重组腺病毒进行鉴定,培养上清ELISA法测鼠IGF-1蛋白为91.6±26.8 ng/ml,Western blotting分析感染细胞有特异性rIGF-1条带.本研究成功构建Ad-rIGF-1重组腺病毒,并在胰岛β细胞有效表达,为下一步研究rIGF-1因子对胰岛β细胞的保护及基因治疗1型糖尿病奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈志红	青岛大学医学院附属医院	41	234	8.0	13.0
2	李堂	青岛大学医学院附属医院	88	531	12.0	17.0
3	胡素娟	青岛大学医学院附属医院	14	39	4.0	5.0
4	王桂琴	青岛大学医学院附属医院	6	10	2.0	3.0