革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用

• 作者: 丛延广 熊坤 王景 穆媛媛 陈志瑾 黎庶
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 敲除 载体构建 突变株 基凶功能
• 年，卷（期）: 2009,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2299-2301
• 页数: 3页
• 分类号: R378|R394-33|R394.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2009.23.002

摘要

目的 构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性.方法 构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点ori R6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ4paⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-Sac Ⅱ-BgtⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段.载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性.结果 成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株.结论 本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的 基凶的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	穆媛媛		2	35	2.0	2.0