铜绿假单胞菌phoQ基因敲除对氨基糖苷类抗生素耐药性的影响

• 作者: 严杰 夏肖萍 孙爱华 楼宏强 汪浙炯
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 phoQ/phoP基因 基因敲除 氨基糖苷类抗生素
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 801-806
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.09.008

摘要

目的 分析氨基糖苷类抗生素敏感或耐药铜绿假单胞菌菌株二元信号系统PhoQ/PhoP编码基因序列并确定该系统与耐约性关系.方法 采用PCR获得铜绿假单胞菌菌株全长phoQ和phoP基因片段,T-A克隆后测序.构建phoQ和phoP基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的 重组表达产物rPhoQ和rPhoP,皮内注射免疫法制备兔抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价.采用Red重组系统敲除氨基糖苷类抗生素耐药铜绿假单胞菌菌株phoQ基因,采用PCR、测序和Western blot对phoQ突变株进行鉴定.采用试管稀释法测定各铜绿假单胞菌野生株和突变株对4种氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度(MIC).结果 与GenBank中相关序列比较,所克隆的phoP和phoQ基因核苷酸和氨基酸相似性分别为98.7%～99.6%和98.7～100%、98.4%～99.8%和99.1%～100%.采用pET-42a和E. coli BL21DE3系统成功地表达了rPhoQ和rPhoP.rPhoQ和rPhoP兔抗血清免疫双扩效价分别为1:4和1:8抗血清.经PCR、测序和Western blot鉴定,两株phoQ突变株phoQ基因及产物均缺失.上述phoQ突变株对4种氨基糖苷类抗生素的MIC值分别为其野生株的1/512～1/2048.结论 PhoQ/PhoP是序列保守的铜绿假单胞菌二元信号转导系统,该系统介导细菌对氨基精苷类抗生素的耐药性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙爱华		112	523	11.0	15.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
3	楼宏强	金华职业技术学院医学院	27	63	5.0	6.0
4	夏肖萍	浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科	9	57	4.0	7.0
5	汪浙炯	浙江大学医学院病原生物学系	1	4	1.0	1.0