动物用质粒DNA内毒素去除方法的建立及其质量检验

• 作者: 孙怀昌 张泉 朱鸿飞 袁燕 袁维峰
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: TritonX-114 内毒素 转染效率 表达 安全性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 63-66,96
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3477字
• 语种: 中文

摘要

用自行改进设计的TritonX-114方法去除动物用重组质粒DNA中的内毒素,鲎试剂检测方法确定每毫克质粒DNA中内毒素的含量为50 EU.将3种不同方法制备的重组质粒pEGFPNl包裹后转染COS-7、MDCK和Marc145细胞,结果表明,经TritonX-114去除内毒素后的质粒DNA(A)与无热源质粒提取试剂盒制备的质粒DNA(B)的转染效率相当,比未经内毒素去除的质粒DNA(C)的转染效率高.将上述3种方法制备的pcDNAlacZ经PEI包裹后尾静脉注射小鼠.注射后每隔2 d扑杀小鼠,取其心、肝、脾、肺和肾组织,定量检测β-半乳糖苷酶的表达和持续时间,结果显示报告基因仅在小鼠的心、脾和肝组织中表达至第8天,A与B的表达水平接近,且明显高于C制备的pcDNALacZ的表达水平,提示经TritonX-114去除内毒素后的质枉DNA可提高转染效率和表达水平.多种动物体内注射重组质粒后,无体温升高等异常-临床表征,进一步说明了使用经TritonX-114去除内毒素的质粒DNA具备良好的安全性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	张泉	扬州大学兽医学院	51	346	8.0	17.0
3	袁燕	扬州大学兽医学院	85	327	10.0	14.0
4	朱鸿飞	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	55	257	8.0	13.0
5	袁维峰	扬州大学兽医学院	8	41	4.0	6.0