原代卵巢上皮性癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

• 作者: 刘特 张健 王丽华 程蔚蔚 赖东梅 黄勇
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢肿瘤 肿瘤干细胞 肿瘤细胞 培养的 培养基 无血清
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 936-940
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2009.12.013

摘要

目的 研究无血清培养基悬浮培养原代卵巢上皮件癌(卵巢痛)细胞,筛选并鉴定卵巢癌千细胞样细胞.方法 卵巢癌组织取自1例卵巢浆液性囊腺痛Ⅲ期、细胞分化2级的患者,分离的原代细胞培养于无血清培养液[添加表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)和胰岛素等细胞因子]得到球样细胞团细胞,并采用常规含血清的培养液进行培养得到贴壁细胞.应用定量PCR技术检测球样细胞团细胞表达干细胞标志基因的情况,应用四甲基偶氮唑蓝比色法、Hoechst 33342染色的流式细胞仪检测球样细胞团细胞的耐药性,并榆测球样细胞团细胞的裸鼠体内致瘤性.结果 在无血清添加细胞因子的培养条件下,原代卵巢癌细胞形成球样细胞团,这些细胞能够存活、增殖、具有自我更新的功能.球样细胞团细胞Nanog、Oct-4、Sox-2、nestin、CD_(133)、CD_(117)及ABCG2等干细胞标志基因的mRNA表达量为分化贴壁细胞的14～400倍.球样细胞团细胞还具有对顺铂和紫杉醇更强的耐药性,将顺铂与紫杉醇同时作用于贴壁细胞及球样细胞团细胞48及72 h后,球样细胞团细胞抑制率为31%、29%,显著低于分化细胞(抑制率为61%、73%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).球样细胞团细胞中Hoechst 33342染色阳性的细胞比例为21.83%,而贴壁细胞为83.04%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).500个球样细胞闭细胞可在裸鼠体内成瘤,肿瘤组织的病理特征与原发肿瘤相似,且高表达上皮性肿瘤标志物CA_(125)和细胞角蛋白7.结论 采用无血清悬浮培养法从原代卵巢癌组织中获取的球样细胞团细胞,可能含有比例较高的具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞样细胞,并具有干细胞的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张健	上海交通大学附属国际和平妇幼保健院肿瘤妇科	271	1378	19.0	25.0
2	刘特	上海交通大学附属国际和平妇幼保健院肿瘤妇科	16	86	5.0	9.0
3	程蔚蔚	上海交通大学附属国际和平妇幼保健院肿瘤妇科	69	503	11.0	20.0
4	王丽华	上海交通大学附属国际和平妇幼保健院肿瘤妇科	48	228	9.0	13.0
5	赖东梅	上海交通大学附属国际和平妇幼保健院肿瘤妇科	16	102	5.0	9.0
6	黄勇	上海交通大学附属国际和平妇幼保健院肿瘤妇科	24	63	5.0	7.0