猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 党占国 夏平安 尹彦涛 崔保安 李伟娟 李素平 王中明 王建举
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PRRSV N蛋白 原核表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 537-541
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4466字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 美洲株 ATCC VR2332 的 N 蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从PRRSV Hn-1/06株中克隆了大小为372 bp的 N 蛋白基因(EU025136).将 N 蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-N,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为33 000的可溶性融合蛋白N-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的29%.将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300 mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达,91%.用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性.利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗PRRSV N 蛋白抗体的间接ELISA方法(N-ELISA),并将所建立的N-ELISA与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为92.7%.结果表明,本试验建立的N-ELISA与IDEXX-ELISA具有同样高的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏平安	河南农业大学牧医工程学院	65	271	9.0	14.0
2	尹彦涛	河南农业大学牧医工程学院	10	40	2.0	6.0
3	王中明	河南农业大学牧医工程学院	13	37	3.0	6.0
4	李伟娟	河南农业大学牧医工程学院	9	42	4.0	6.0
5	李素平	河南农业大学牧医工程学院	22	128	6.0	11.0
6	党占国	河南农业大学牧医工程学院	9	63	3.0	7.0
7	王建举	河南农业大学牧医工程学院	7	50	4.0	7.0