白腐真菌细胞色素P450的诱导及检测方法研究

• 作者: 宁大亮 李冬 王慧
• 来源期刊: 环境科学
• 学科: 地球科学
• 关键词: 白腐真菌 细胞色素P450 诱导 CO结合差光谱 细胞破碎
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 页码范围: 2485-2490
• 页数: 6页
• 分类号: X172
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0250-3301.2009.08.050

摘要

以CO结合差光谱为基本检测法,研究了白腐真菌黄孢原毛平革菌中细胞色素P450的诱导和适宜的分离检测方法.结果表明,正己烷对该真菌P450有显著的诱导作用,P450诱导量受正己烷浓度和诱导时间的影响,每小时投加正己烷2 μL/mL、诱导6 h可使该真菌微粒体P450比浓度高达140～160 pmol/mg.在此基础上,本研究优化了分离P450时破碎细胞的方法以及光谱法检测P450的条件.破碎细胞时,采用高速分散结合玻璃研磨,比采用玻璃研磨、超声破碎和珠磨等方法分离的微粒体P450含量高1～5倍,是更为适宜的破碎方法.检测CO结合差光谱时,通气和还原条件对P450检测值有显著影响,较适宜的条件为:样品池和对照池分别通入等量的CO和N_2,通气流量为3 mL/min(300 μL样本),通气时间40 s;通气后投加还原剂低亚硫酸钠,投加浓度为0.4 mol/L.