靶向wnt-1基因的RNA干涉质粒构建及抑制U251细胞增殖的实验研究

• 作者: 张恒柱 李健 武永康 段晓春 王晓东 董伦
• 来源期刊: 实用临床医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: wnt-1 RNA干涉 质粒 胶质瘤 U251细胞 增殖
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-27,33
• 页数: 6页
• 分类号: R739.4
• 字数: 4998字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2009.01.007

摘要

目的 构建靶向wnt-1基因的RNA干涉表达载体,转染人胶质瘤细胞U251中,研究该质粒的抑瘤效果.方法 根据siRNA设计原则,通过软件设计,选取含有21个核苷酸(21nt)靶序列,形成siRNA的DNA模板并克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,获得靶向抑制wnt-1基因表达的siRNA表达载体,并经酶切测序鉴定.用该干涉质粒转染U251细胞,通过逆转录PCR、Western blotting方法检测wnt-1基因mRNA和蛋白表达水平,用MTT法、流式细胞术初步评价对U251细胞的增生、细胞周期影响.结果 成功构建针对靶向wnt-1基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA-wnt-1 RNA干涉质粒,可显著抑制U251细胞wnt-1基因的mRNA和蛋白表达.MTT法分析转染细胞增生明显抑制,流式细胞仪分析细胞周期证实转染后比空白对照组受到阻滞.结论 靶向wnt-1基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA-wnt-1 RNA干涉质粒构建成功,并可特异性的沉默wnt-1基因蛋白表达,使细胞增长减慢,细胞周期阻滞,本实验通过wnt-1的RNA干涉,为由wnt-1介导的wnt信号通路在胶质瘤发病机制中的抑瘤作用提供了依据,并为进一步该基因的基因治疗临床实验提供了可靠基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董伦	扬州大学临床医学院神经外科	39	168	7.0	11.0
2	武永康	扬州大学临床医学院神经外科	47	122	6.0	8.0
3	王晓东	扬州大学临床医学院神经外科	39	134	7.0	10.0
4	张恒柱	扬州大学临床医学院神经外科	71	255	8.0	13.0
5	李健	扬州大学临床医学院神经外科	10	23	3.0	4.0
6	段晓春	扬州大学临床医学院神经外科	11	39	4.0	6.0