间充质干细胞在人胎盘组织中的染色定位及整体灌注分离培养

• 作者: Lü Guo-zhong Miao Zong-ning Wang Ling Xu Qiu-lan Zhang Xue-guang 吕国忠 张学光 徐秋岚 王玲 苗宗宁
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞 胎盘 分离培养
• 年，卷（期）: 2009,（36）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7133-7137
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5746字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225 2009.36.026

摘要

背景:由于间充质干细胞在成人骨髓的数量以及分化能力随年龄的增长而减低,不同的胎儿组织被用来研究是否存在间充质干细胞.胎盘组织中间充质干细胞主要分布在羊膜和绒毛膜等来源于胎儿的组织,其抗原表达、分化潜能与骨髓间充质干细胞特征相似.目的:观察间充质干细胞在人胎盘组织中的分布规律.设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02/2009-03在无锡第三人民医院烧伤研究所完成.材料:在产妇知情同意的情况下,经医院伦理委员会批准,获取临床正常剖宫产之足月健康产妇的新鲜胎盘组织,所选择的胎盘脐带附着点均在胎盘中央或稍偏位,大小及质量在正常范围内.方法:将胎盘组织分为3组,分别是中央带组即脐带附着处,边缘带组即距脐带附着点最远处和中间带组即两者之间中点处.分别全层连续切片,以抗CD166、抗CD44、抗CD29分别做免疫荧光和免疫组织化学染色,显微镜下观察阳性细胞分布区域,采用HPIAS一1000彩色病理图像分析系统进行图像分析,同时应用整体灌注的方法分离培养细胞并用流式细胞仪鉴定原代和第6代培养细胞的表面标志.主要观察指标:组织切片免疫荧光和免疫组织化学染色阳性细胞表达及分布情况,分离培养细胞的生长情况以及细胞表面标志.结果:3个标记物CD166、CD44、CD29阳性表达细胞的分布情况较一致,主要集中于血管内皮下及血管附近间质内;胎盘中央带阳性细胞较集中,阳性表达的强度较强,边缘带阳性细胞稀少,阳性表达的强度较弱.整体灌注的方法可以分离培养细胞,流式细胞仪检测结果显示,原代以及第6代胎盘间充质干细胞均表达CD105、CD106和CD166,不表达CD34和HLA-Dr,两代细胞表达强度无明显区别,与骨髓间充质干细胞的表面标志相一致.结论:胎盘各部位均存在CD166、CD44、CD29阳性表达的细胞,细胞的分布与血管有一定的相关性,脐带附着处下方胎盘组织相对其他部位可能为间充质干细胞富集区域.