大鼠胎脑神经干细胞的分离培养及电穿孔转染

• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 分离培养 电穿孔 转染
• 年，卷（期）: 2009,（42）
• 所属期刊栏目: 新技术新方法
• 页码范围: 3007-3009
• 页数: 3页
• 分类号: R74
• 字数: 2179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2009.42.016

摘要

目的 分离培养大鼠胎脑神经干细胞(NSC),研究电穿孔技术在NSC中的转染效率.方法 从sD胎鼠脑组织中分离、培养和扩增NSC,利用免疫荧光组织化学技术对NSC及其分化细胞进行鉴定.使用电穿孔技术将质粒pEGFP-N1转染入NSC,利用其表达的绿色荧光蛋白(GFP)作为转染成功的报告物或标记物,在荧光显微镜下根据发出绿色荧光的NSC数量,计算出转染效率.结果 从SD胎鼠脑组织中分离的细胞在体外可长时间自我增殖,原代及传代克隆细胞均表达NSC的特异性抗原巢蛋白,且诱导分化后可表达星形胶质细胞的特异性抗原-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元的特异性抗原-神经元特异性烯醇化酶(NSE).用电穿孔技术转染神经干细胞,其效率为17.9%～69.1%,平均30.5%.结论 本实验成功分离出具有自我增殖和多向分化潜能的胎鼠NSC,并证实电穿孔技术可对其进行高效转染,为进一步研究NSC的转基因治疗提供实验基础.