有机磷农药降解酶的基因克隆与重组表达

• 作者: 张伟伟 杜欣军 潘明飞 潘涛 王硕 郭睿莉
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 地球科学
• 关键词: 有机磷 降解酶基因 克隆 重组表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 995-997,1033
• 页数: 4页
• 分类号: X592
• 语种: 中文

摘要

目的:旨在从活性污泥中直接克隆有机磷农药降解酶基因,使其在大肠杆菌中大量表达.方法:利用土壤DNA提取技术从山东某农药厂活性污泥中提取DNA,根据有机磷农药降解酶基因设计引物,用巢式PCR从活性污泥DNA中扩增特异性片段,将该基因片段连接至表达载体pET-30a(+)中,并转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,并对诱导剂浓度和诱导时间进行优化.结果:利用巢式PCR从活性污泥DNA中扩增出长度为1003 bp的特异性片段,将该片段测序并进行序列比对,结果显示该片段与甲基对硫磷降解酶基因的同源性为99%,且含有完整开放阅读框,长度为993 bp;IPTG诱导后获得分子量为41.7 kD的重组表达蛋白;经优化,IPTG的最佳诱导浓度为0.1 mmol/L,最佳诱导时间为5 h.结论:成功克隆出有机磷农药降解基因并获得高效重组表达蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王硕		117	823	15.0	22.0
2	杜欣军		23	68	4.0	8.0
3	潘涛		2	6	1.0	2.0
4	张伟伟		5	119	3.0	5.0
5	郭睿莉		1	0	0.0	0.0
6	潘明飞		2	32	1.0	2.0