生长分化因子5真核表达质粒转染小鼠骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化

• 作者: 丁凡 刘之川 张宇坤 邓超 邵增务 郭兵
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 生长分化因子5 骨髓基质干细胞 软骨分化 基因转染 质粒
• 年，卷（期）: 2009,（28）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5449-5452
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 5045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.28.010

摘要

背景:生长分化因子5是软骨与骨组织形成、发育的重要调解因子,在诱导软骨形成,促进骨、软骨、肌健韧带损伤修复方面发挥重要作用.目的:小鼠骨髓基质干细胞体外转染真核表达质粒pcDNA 3.1(+),生长分化因子5,检测与软骨形成分化相关的细胞外基质及蛋白多糖的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/12在武汉协和医院中心实验室完成.材料:雄性昆明种小鼠20只,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供.生长分化因子5真核表达质粒pCDNA 3.1(+)/生长分化因子5为自备.方法:全骨髓贴壁法体外分离培养小鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞接种到6孔板,在细胞生长到90%融合时开始转染.设立3组:转染组采用Lipofectamine<'TM>2000进行脂质体介导pcDNA3.1(+)/生长分化因子5重组质粒瞬时转染;空质粒组转染窄质粒pcDNA 3.1(+);空白对照组只加入等量脂质体,其余步骤相同.主要观察指标:转染后72 h通过RT-PCR及免疫细胞化学检测生长分化因子5基因与蛋白的表达鉴定转染是否成功,同法检测软骨基质Ⅱ型胶原的表达,转染后14 d阿尔辛蓝染色检测蛋白聚糖的表达.结果:转染组有一大小为219 bp的特异性扩增条带,骨髓基质干细胞胞浆内呈棕色阳性染色;而空质粒组、空白对照组均未发生生长分化因子5基因转录,无特异性扩增条带,且细胞胞浆未见明显染色.转染组町检测到Ⅱ型胶原基因的表达,基因大小225 bp,Ⅱ型胶原细胞胞浆中可见棕黄色染色;空质粒组、空白对照组均未检测到Ⅱ型胶原基因的表达,SP染色均无明显染色.阿尔辛蓝染色后转染组细胞呈蓝染,空质粒组、空白对照组均未见明显异染性着色.结论:pcDNA3.1(+)/生长分化因子5转染骨髓基质干细胞能显著增加Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达,促进骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵增务	华中科技大学同济医学院附属和医院骨外科	193	1257	19.0	25.0
2	郭兵	华中科技大学同济医学院附属和医院骨外科	13	70	5.0	8.0
3	邓超	华中科技大学同济医学院附属和医院骨外科	56	785	17.0	25.0
4	丁凡	华中科技大学同济医学院附属和医院骨外科	31	176	7.0	12.0
5	张宇坤	华中科技大学同济医学院附属和医院骨外科	25	117	7.0	9.0
6	刘之川	华中科技大学同济医学院附属和医院骨外科	7	42	4.0	6.0