体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞及其生物学特性鉴定

• 作者: 杨钰兴 肖明朝 苟欣 邱明
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 分离培养 生物学特性
• 年，卷（期）: 2009,（36）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7083-7086
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4779字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.36.016

摘要

背景:现阶段急需建立一种稳定的体外分离培养内皮祖细胞的方法,骨髓中内皮祖细胞的含量丰富,增殖能力强,而且容易获得,操作简单.目的:拟在体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞,并对其生物学特性进行鉴定.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08/12在重庆医科大学附属第一医院中心实验室完成.材料:清洁级2周龄SD大鼠20只,由重庆医科大学实验动物中心提供.方法:无菌条件下分离大鼠股骨和胫骨,用预冷至4℃的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液冲洗骨髓腔,以密度梯度离心法收集单个核细胞层,含体积分数为20%胎牛血清的M199培养液重悬细胞,制成单细胞悬液后进行细胞计数,按1×109L-1浓度接种到预先用纤维连接蛋白包被的培养瓶中,37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度恒温培养.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学检测内皮祖细胞表面特异性抗原CD133、内皮祖细胞表面抗原CD34和血管内皮生长因子受体KDR的表达,并进行流式细胞仪定量分析和细胞生长曲线分析.结果:新分离获得的骨髓单个核细胞为小圆形,培养4 d后贴壁细胞呈"集落"样生长,中间为圆形贴壁细胞,外周梭形细胞较多,传代后梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管"样排列.培养第4,7,10,14天贴壁细胞CD34,KDR,CD133均呈阳性表达,CD133阳性细胞第10天时开始减少.流式细胞仪检测结果显示,CD133/KDR双阳性细胞率逐渐升高,10 d时达峰值,随后下降.KDR阳性细胞率随培养时间的延长而逐渐升高.原代细胞生长曲线显示细胞在第3～6天处于指数生长期,贴壁细胞大量增殖,呈"集落"样生长.结论:采用密度梯度离心法可成功从SD大鼠骨髓中分离获得内皮祖细胞,加入M199培养液后能够贴壁增殖,并可以分化为内皮细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苟欣	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	194	861	13.0	19.0
2	肖明朝	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	227	1484	18.0	29.0
3	邱明	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	4	11	2.0	3.0
4	杨钰兴	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	4	11	2.0	3.0